Détecter la présence d'OGM dans un aliment

TP lycée

Le test proposé (PCR) permet de détecter environ 85 % des aliments contenant des OGM. Il est basé sur l'identification par PCR du promoteur E-P35S et du terminateur NOS3' qui contrôlent, dans la plupart des cas, l'expression du transgène.
Un aperçu du protocole (images) et un résultat (gel) sont ici présentés.
Voir également "Test OGM" présenté dans le site SVT Lycée
Préparation d'une suspension épaisse de l'aliment à tester
Microtube à PCR préparé pour l'amplification
Les élèves recherchent, dans l'aliment testé par PCR (voir principe Site SVT Lycée) 3 fragments d'ADN cible:
- un marqueur de l'ADN d'origine végétale, une séquence du gène qui code une protéine du photosystème II (PSII) dont la mise en évidence atteste de la présence, dans l'extrait alimentaire, d'un ADN végétal de bonne qualité et pouvant être amplifié. La taille de l'amplicon correspondant à ce gène est de 455 pb.
- un marqueur de la cassette d'expression du transgène, spécifique du promoteur
P-35S (CaMV35S) qui correspond à une séquence de 203 pb.
- un marqueur de la cassette d'expression du transgène, spécifique du terminateur NOS3' qui correspond à une séquence de 225 pb.
Les fragments d'ADN de 203 pb et de 225 pb ne sont pas résolus par l'électrophorèse (une seule bande).
Mise en place des microtubes dans le thermocycleur
Extraction de l"ADN
Bain marie (95°C, 5 min)
Dépôts des produits de PCR dans les puits du gel d'agarose
Electrophorégramme
Gel révélé par le colorant Blast-Fast
Rq/ Il n'est pas possible de prévoir la taille des amplicons en travaillant sur les séquences car Bio-Rad qui commercialise le kit, refuse de communiquer les séquences des 3 couples d'amorces utilisés.