Diagnostic du statut d'immunisation antitétanique

Protocole d'un test immunochromatographique rapide
Explications

Objectifs :
- présenter les principales étapes du protocole suivi lors de la réalisation d'un test portant sur un prélèvement de sang total capillaire
- fournir les informations permettant de comprendre le déroulement du test au niveau moléculaire.

Prélèvement et dépôt du sang

Rq / Les conjugués utilisés ici sont marqués au latex coloré. Les microsphères du polymère sont traitées pour qu'elles puissent adsorber des protéines. Des microsphères mauves sont recouvertes d'anatoxine tétanique alors que les microsphères recouvertes par des Ig de souris sont colorées en bleu-gris.
Dépôt de tampon diluant
Après absorption complète de la goutte de sang, déposer 3 gouttes de tampon diluant. Déclencher le chronomètre.
Formation des complexes Ac. anti-toxine tétanique / anatoxine tétanique marquée (Ag) puis migration avec le diluant
Le tampon diluant migre (capillarité) et entraîne les constituants solubles du sang, en particulier les Ac. anti-toxine tétanique, s'ils sont présents.
Arrivés, avec le diluant qui progresse, au niveau de la zone où se trouvent les conjugués, les Ac. anti-toxine tétanique (s'ils sont présents) forment avec les molécules d'anatoxine marquées au latex, des complexes Ag / Ac.
Les complexes Ac / anatoxine tétanique (Ag) marquée au latex bleu-gris migrent à leur tour, accompagnés par les IgG de souris marqués au latex mauve. Ils progressent dans la membrane de nitrocellulose.
Apparition des lignes colorées

Quand les complexes Ac. anti-toxine tétanique / anatoxine tétanique marquée passent au niveau du site de capture où se trouvent des molécules immobilisées d'anatoxine tétanique, certains d'entre-eux peuvent être retenus. Si leur nombre est suffisant*, une ligne colorée apparaît à cause de la présence des nombreuses microsphères de latex bleu-gris.
Quand les IgG de souris marquées passent au niveau de la zone où se trouvent les Ac immobilisés anti-IgG (partie constante) de souris, des complexes se forment, une ligne mauve apparaît (contrôle interne) à cause de la présence de nombreuse micosphères de latex mauve.
L'excès de réactifs non capturés et de diluant migre dans la bandelette absorbante distale.
* Le nombre de complexes marqués retenus est directement dépendant de l'abondance des complexes formés qui dépend de la concentration des Ac antitétaniques dans le sang. La ligne test colorée est visible si le taux d'Ac recherché atteint la valeur de 0,1 UI / ml.

Lecture du test

Le test est lu 10 min après avoir déposé le diluant. Ici la ligne correspondant au contôle interne est bien apparente, ainsi que celle du test .Le taux d'Ac anti-toxine tétanique dans l'échantillon de sang testé est supérieur au seuil (0,1 UI / ml). La personne est correctement protégée.